Реферат: Сравнительная характеристика методов лабораторной диагностики трихомоноза
Реферат: Сравнительная характеристика методов лабораторной диагностики трихомоноза
МИНИСТЕРСТВО ОБРАЗОВАНИЯ И НАУКИ УКРАИНЫ
ОДЕССКИЙ НАЦИОНАЛЬНЫЙ УНИВЕРСИТЕТ им. И.И.МЕЧНИКОВА
БИОЛОГИЧЕСКИЙ ФАКУЛЬТЕТ
Кафедра микробиологии, вирусологии.
СРАВНИТЕЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ЭФФЕКТИВНОСТИ МЕТОДОВ ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИ ТРИХОМОНОЗА
Квалификационная работа бакалавра
студента пятого курса
заочного отделения
БОГУША Андрея Николаевича
Научный руководитель
кандидат биологических наук, доцент
Панченко Николай Никитович
Допущена к защите Защищена на заседании ДЕК “____”_________2004р. “____”__________2004р.
Протокол заседания с оценкой_________________
кафедры №____________ Протокол №____________
Заведующий кафедры Секретарь ДЕК_____________ ______________________
ОДЕССА-2004
СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ……………………………………………………………………………..3
1.ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ ………………………………………………...……………5
1.1.Систематика и биологические особенности трихомононад…………….……..5
1.1.2. Метаболизм T.vaginalis………………………………………………………….7
1.1.3. Культуральные свойства трихомонад………………………………….………8
1.2. Устойчивость к физическим, химическим факторам и во внешней среде……8
1.2.1. Условия инфицирования трихомонадами………………...……………..…….9
1.3. Механизмы патогенеза урогенитальной инфекции трихомонадной этиологии…..…………………………………………………………………………..10
1.3.1. Клиника трихомоноза у мужчин………………………………………………12
1.3.2. Клиника трихомоноза у женщин………………………………………...……14
1.4. Методы диагностики трихомоноза………………………..…………………….15
1.4.1. Микроскопия нативных и окрашенных препаратов……….………………..16
1.4.1.1. Метод смывов…………………………………………..…………………….16
1.4.1.2. Микроскопия нативных препаратов…………………………….….……….17
1.4.1.3. Микроскопия окрашенных препаратов…………………………….…....….18
1.4.2.Культуральное исследование……………………………………….…………21
1.4.3.Иммунологическиеметоды……………………………………….…………….22
1.4.4.Методы генной диагностики T.vaginalis…………………….…….…………..23
1.5.Лечение трихомоноза……………………………………………….……………24
2.МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ...………………………………25
2.1. Исследование культуральным методом………………………………………...25
2.2 Исследование методом микроскопии мазка…………………………………….26
2.3. Исследование методом ПЦР…………………………………………………….27
3.РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ……………………...28
3.1.Анализ данных выявления T.vaginalis у жителей Одесского региона………...30
ВЫВОДЫ……………………………………………………………………………...33
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ……………………………………………………………………………34
Введение
Трихомоноз является одним из наиболее распространённых заболеваний мочеполового тракта и занимает первое место среди болезней, передаваемых половым путём. Инфекция имеет «космополитический» характер, от неё страдают 170 миллионов человек на земном шаре.
Это широко распространённое паразитарное заболевание, вызываемое Trichomonas vaginalis одинаково часто поражающее, как мужчин, так и женщин. Урогенитальная трихомонада была впервые описана 1863 году. Парижский врач Допле обнаружил её в выделениях из влагалища больных женщин и дал ей название, которым пользуются и по настоящее время. Трихомонады выявляются у 10% «здоровых» женщин и более чем у 30% имеющих явные клинические проявления. В тропических странах этот показатель изменяется от 15 до 40% .Оценки частоты пораженности мужчин в разных странах резко отличаются. Так, в докладе Научной группы ВОЗ отмечается, что трихомонады редко бывают причиной не гонококковых уретритов. В Польше патология составляет около 4% всех НГУ у мужчин, в Болгарии – 10%, в странах СНГ – от 23 до 47%.
Частота инфицирования трихомонозом клинически здоровых женщин в развитых странах составляет 2-10%. В США ежегодно регистрируют примерно 3 млн. новых случаев заболевания женщин (это приблизительно 2,4%). В России в 1996 году на 100 тыс. населения зарегистрировано 399 (0,34%) случаев заболевания[3,8].
Подробную характеристику заболеваемости трихомонозом московской популяции в возрастной группе от 14 до 59 лет мужчин и женщин дал М.М. Васильев [9]. Среди больных трихомонозом и смешанной гонорейно - трихомонадной инфекцией подавляющее число пациентов были незамужнем /неженаты или разведены (практически 80%). Как правило, возраст больных трихомонозом и смешанной инфекцией женщин колебался в пределах 18-39 лет, мужчин – 15- 39 лет. Последние данные подтверждают мировую практику – болезнь охватывает население, ведущее активную половую жизнь. Заболевание протекало с минимальными клиническими проявлениями, а зачастую и без них! Поэтому чаще трихомоноз выявлялся при профилактических осмотрах и привлечении к обследованию половых партнёров. При этом трихомонадное носительство выявлялось у 40- 50% больных смешанной урогенитальной инфекцией[4,11,12,28,40].
Учитывая всё выше изложенное, изменить ситуацию в лучшем направлении, можно разработав политику проведения массового скрининга. А это, невозможно не имея доступных, точных и надёжных методов и средств экспресс диагностики трихомоноза.
Целью настоящей работы была оценка степени надёжности и эффективности методов лабораторной диагностики трихомоноза. А так же анализ статистических данных по выявлению трихомонозов, в Одесском регионе за период 1998-2003 годы.
1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1 Систематика и биологические особенности трихомонад
Возбудителем заболевания является Trichomonas vaginalis, он относится к царству высших протистов – Protozoa, классу жгутиковых – Flagella, семейству - Trichomonadidae, роду – Trichomonas. В организме человека существует три вида трихомонад: Trichomonas tenax (elongata), Trichomonas hominis (abdominalis), Tricomonas vaginalis. В ротовой полости чаще присутствует Trichomonas tenax. При диспепсических расстройствах, обычно у детей выделяют коменсал толстого кишечника – Trichomonas hominis[24,27,31,32].
Возбудитель имеет овально – грушевидную, продолговатую, многоугольную и другие формы в зависимости от встречаемых на пути препятствий. Размеры трихомонад колеблются от 8 до 40 мкм и более. Мелкие особи выявляются при остром, крупные при хроническом течении процесса. Снаружи возбудителя имеется тонкая оболочка - перипласт, снабженная в передней части тела щелью – цистомой крючкообразной формы, выполняющей функцию рта. Тело трихомонад состоит из тонкозернистой протоплазмы с многочисленными вакуолями.
В передней части тела паразита расположено ядро продолговато – овальной формы, круглой или грушевидной формы, содержащей 5 – 6 ядрышек. Рядом с ядром находится несколько телец в виде зерен, называемых блефоропластом, от которого начинается прямая осевая нить аксонем (аксостиль), представляющая собой упругий тяж, расположенный внутри протоплазмы по длинной оси и выступающий наружу в виде шипа. На переднем конце тела трихомонады имеется четыре свободных жгутика, отходящих от блефаропласта. Пятый жгутик идет назад, примерно до трети длины тела, образуя край ундулирующей мембраны, сформированной из перипласта.
Благодаря движениям жгутиков и волнообразной (ундулирующей) мембране трихомонады могут активно перемещаться. Они способны образовывать псевдоподии, обеспечивающие амебовидное движение. Высокая пластичность цитоплазмы позволяет трихомонаде внедряться в очень узкие промежутки между клетками. Поэтому трихомонады могут существовать в жгутиковой и амебовидной форме, при которой движения жгутиков не видны. Перемещение возбудителя происходит настолько медленно, что он кажется неподвижным. В такой (неподвижной) стадии трихомонады либо совсем лишены жгутиков, либо прижимают их к телу, вследствие чего их нельзя рассмотреть.
Электронно – микроскопически подтверждено существование круглых неподвижных форм трихомонад, лишенных ядра и жгутиков. В мочеиспускательном канале у мужчин их содержится меньше, чем у женщин, и они малоподвижны.
Питается трихомонада эндоосмотически и путём фагоцитоза. Оптимальная среда для её существования рН 5,2 – 6,2. Именно поэтому наиболее благоприятные условия для трихомонад создаются после менструации. Трихомонады не образуют цисты или других форм устойчивости обеспечивающих им сохранение вне человеческого организма.
Влагалищная трихомонада представляет собой самостоятельный вид, в естественных условиях обитает только в мочеполовом аппарате человека и не поражает животных. У женщин местом обитания Trichomonas vaginalis является влагалище, у мужчин – предстательная железа и семенные пузырьки[35,39].
1.1.2 Метаболизм T. Vaginalis
Несмотря на то, что трихомонады по многим характеристикам напоминают эукариоты, они отличаются по энергетическому метаболизму и имеют много общего с примитивными анаэробными бактериями. Трихомонады имеют - гидрогеносомы, окружённые двойной мембраной, которые являются более совершенными аналогами митохондрий и выполняют схожие метаболические функции.
T. vaginalis демонстрирует черты, являющиеся общими для всех анаэробов в отношении углеводного и энергетического метаболизма, что контролируется ферментами, работающими, как в аэробных, так и в анаэробных условиях. Продукты метаболизма включают: ацетат, лактат, малат, глицерол, СО2, а в анаэробных условиях - водород.
T.vaginalis - это облигатный паразит, потерявший способность самостоятельно синтезировать многие макромолекулы (пурины, пиримидины, липиды), поэтому важнейшие питательные компоненты трихомонады получают из вагинального, уретрального секрета при фагоцитозе эпителия и бактериальных клеток из состава симбиотической и условно – патогенной микрофлоры мочеполовых путей. Последнее обстоятельство диктует необходимость включения в культуральную среду для роста T. vaginalis все важнейшие макромолекулы, витамины и минералы. Для репродукции трихомонад особенно важна сыворотка крови, содержащая липиды, жирные кислоты, аминокислоты и следы металлов[9,19,22,33,47].
1.1.3 Культуральные свойства трихомонад
Трихомонады хорошо растут в анаэробных условиях, оптимум их роста при рН среды 5,5 – 7,5 и температуре 35 – 37 градусов Цельсия. Культура Trichomonas vaginalis в отличие от других культур трихомонад не способна к гемолизу, плазмокоагуляции, хорошо разлагает глюкозу, мальтозу, крахмал, слабо – лактозу, не образует сероводорода и индола.
Влагалищную трихомонаду можно культивировать на питательных средах, на клеточных культурах и куриных эмбрионах. Наиболее пригодная среда для культивирования - печёночная среда с цистеином, пептоном и мальтозой. Культивируют от 3 до 5 суток[37,39].
1.2 Устойчивость к физическим, химическим факторам
и во внешней среде
Вне организма человека трихомонада быстро теряет жизнеспособность. В течении нескольких секунд погибает от высушивания, при термической обработке в диапазоне до 55 градусов Цельсия она сохраняет жизнеспособность - 30 секунд. На трихомонаду губительно действуют прямые солнечные лучи. При исследовании секрета простаты, возбудитель гибнет (визуально теряет всякую подвижность) за время пока мазок несут к микроскопу.
Среди химических веществ бактерицидно действует раствор ртути дихлорида (1:1000 – 1:1500), карболовой кислоты (1%) и хлорамин Б (1%).
Трихомонада остаётся жизнеспособной при температуре -10 градусов Цельсия до 22-45 минут, при температуре 1-4 градуса Цельсия в течении 96-114 часов. Возбудитель также сохраняет жизнеспособность в некоторых биологических жидкостях и выделениях человека. В сперме и моче трихомонады жизнеспособны до суток, несколько часов они выживают во влажном чистом белье[23,39].
1.2.1 Условия инфицирования трихомонадами
Источником инфекции является больной человек, или трихомонадоноситель. В неполовое заражение встречается редко, преимущественно у девочек (через мочалки, ночные горшки, латексные перчатки, медицинские инструменты). Это возможно благодаря тому, что в комочках гноя или слизи урогенитальные трихомонады в течение нескольких часов сохраняют жизнеспособность (до высыхания субстрата или до полного перемешивания его с водой). Водный путь инфицирования отвергается, хотя допускается возможность заражения женщин при совместном приёме ванн, со слабо минерализованной водой, близкой к изотоническому раствору. В акушерской практике часто происходит инфицирование новорожденных от больных матерей.
Для детей характерна очаговость инфекции. Такими очагами могут быть семья, детский коллектив. Заражение происходит при непрямом контакте. Однако при любом пути передачи источником является больной человек или носитель урогенитальных трихомонад.
Вероятность заражения во время полового акта, превышает 80%. Причем этот показатель имеет закономерность с продолжительностью коитуса, и с долей морально гигиенических аспектов.
Мужчины в силу анатомо-физиологических особенностей риску заражения подвержены в меньшей степени, чем женщины. Однако у 60 – 80% имевших половые контакты с больными трихомонозом женщинами паразиты обнаруживаются. У женщины, явившейся источником заражения мужчин трихомонозом, возбудитель выявляется в 100% случаев.
В тех случаях, когда половой акт происходит с использованием барьерных или химических методов контрацепции, случаев заражения практически не отмечают. Некоторые мужчины после коитуса практикуют метод задержки мочи в уретре (путём пережимания крайней плоти), ошибочно полагая добиться трихомонацидного эффекта. Подобная практика часто приводит к тому, что трихомонады поражают не только уретру, а и дистальные отделы мочеполового тракта мужчины. Вероятность развития простатита в этих случаях намного выше, чем при обычном течении трихомоноза, когда вначале поражается только уретра[9,13,14].
1.3 Механизмы патогенеза урогенитальной инфекции
трихомонадной этиологии
Для трихомоноза присущи четыре фактора патогенеза такие, как: интенсивность инфекционного воздействия, рН – влагалищного и других секретов, физиологическое состояние эпителия мочеполовой системы, сопутствующая бактериальная флора.
T.vaginalis выделяет во внешнюю среду «клеточный разъединяющий фактор» рассматривающийся как средство, с помощью которого паразит проникает в межклеточное пространство и, разрыхляя ткань, способствует проникновению в субэпителиальные слои бактерий, что в итоге формирует очаг воспаления.
