скачать рефераты
  RSS    

Меню

Быстрый поиск

скачать рефераты

скачать рефератыРеферат: Вплив малих доз радiацii

     5.   Капiляром Салi 0,02 мл. кровi перенести в  центри-

          фужну пробiрку з 0,4мл. 3% розчину оцтовоi кислоти.

     6.   Легким посту куванням по пробiрцi перемiшати вмiст

          i залишити пробiрку для руйнування еритроцитiв.

     7.   Притерти покривне скло до камери Горясва таким чи-

          ном, щоб з'явилися Ньютоновi кiльця.

     8.   Пiдрахувати кiлькiсть клiтин в 25 великих  квадра-

          тах камери Горясва.

     9.   Одержаний результат перерахувати за формулою:

          Х 10/20, де  Х - кiлькiсть  клiтин  в  25  великих

          квадратах.

Нормальна кiлькiсть лейкоцитiв у  дорослоi  людини  коливас-

ться в межах 4500-10000 в 1 куб.мм.


     2.4  МЕТОДИКА  ВИЗНАЧЕННЯ  ДИФЕНРЕНЦIЙОВАНОI    ФОРМУЛИ

                           ЛЕЙКОЦИТIВ.

     Визначення загальноi кiлькостi бiлих кров'яних  тiлець,

дас уяву проiх абсолютну кiлькiсть. Але  не  дас  вiдомостей

про процентне спiввiдношення (диференцiйовану  формулу)  мiж

рiзними видами лейкоцитiв i про якiснi змiни в iх морфологii

при хворобливих станах.

     Визначення диференцiйованоi формули проводиться на фар-

бованому мазку кровi.

     Диференцiйована формула характерно змiнгюсться при рядi

хворобливих станiв i мас надзвичайно важливе дiагностичне  i

прогностичне значення.

     Нормальна диференцiйована формула дорослоi людини  нас-

тупна:

молодi нейтрофiльнi клiжтини        - 0%

паличкоядернi нейтрофiльнi клiтини  - 0-4%

сегментоядернi нейтрофiльнi клiтини - 55-70%

лiмфоцити                           - 20-40%

моноцити                            - 2-6%

еозинофiльнi клiтини                - 1-4%

базофiльнi клiтини                  - 0-1%

плазматичнi клiтини                 - 0-5%

         ВИГОТОВЛЕННЯ МАЗКА КРОВI.

     1.Необхiдною умовою для правильного  пiдрахунку  морфо-

       логiчних особивостей кров'яних клiтин  являсться вда-

       лозроблений i добре забарвлений кров'яний мазок.

     Добре зроблений мазок кровi повинен вiдповiдати наступ-

ним умовам:

     а) починасться на 1 см. вiд вузького  краю  предметного

скла i закiнчусться на 2-3 см. вiд його другого краю.

     Загальна довжина мазка повинна  охоплювати  1/2  -  3/4

скла.

     б) мазок повине бути рiвномiрноi товщини, а  не  хвили-

подiбний. Правельний мазок кровi товщий на початку, поступо-

во тоншас i закiнчусться у виглядi слiду, мов би  залишеного

тонкою щiточкою.

     в) мазок повинен бути вiдокремленим вiд краю.

Шар кровi не повинен доходити до другогоь краю скла.

     Приготування мазкiв проводиться слiдуючим чином:  пред-

метне скло, на якому буде зроблено  мазок,  беруть  за  один

кiнець великим i  вказiвним  пальцями  правоi  руки.  Другий

кiнець, вiдступаючи на 1 см. вiд краю, обережно  дотикасться

до свiжоiкраплi капiлярноi кровiiз пальця, нi в  якому  разi

не торкаючись шкiри в мiсцi проколу.  Крапля  кровi  перехо-

дить на скло, вона повинна мати дiаметр 2-3 мм.

     Предметне скло перекладають у лiву руку взявши його ве-

ликим вказiвним i середнiм пальцямитак, щоб крапля  знаходил

ась зверху на предметному склi, з боку вказiвного  i  серед-

нього пальцiв.

     Шлiфоване скло, яким буде зроблено  мазок  вставлясться

пiд кутом 40-45 на 1-2 мм перд краплею, придержуючи  великим

i вказiвним пальцями правоi руки  край  шлiфованого  скла  i

обидва краi предметного скла. Шлiфоване скло  рухають  назад

так, щоб воно торкалося кровi i крапля поширювалася  в  кутi

мiж шлiфованим i предметним склом. потiм швидким  рухом  ру-

хаючи скло в зв оротньому напрямку роблять мазок.

Протягом того часу коли робиться мазок,  великий  iвказiвний

пальцi правоi руки ковзають по краях предметного скла i  тим

створюють необхiдну опору для накладання шару кровi.

          ФАРБУВАННЯ КРОВ'ЯНОГО МАЗКА.

     Для якiсного дослiдження морфологii  кров'яних  клiтин-

фарбування кров'яного мазка мас важливе значення. Основу су-

часного фарбування кров'яних  клiтин  поклав  петербуржський

лiкар Д.Л.Романовсьий. В 1891  роцi  вiн  запропонував  свiй

барвник. В 1902 роцi Гiмза вдосконалив барвник Романовського.

     Барвник Романовського-Гiмза складасться з лужноi i кис-

лоi частини. Лужна частина - азур 2, А кисла частина - еозин.

Азур 2 забарвлений в яскраво-синiй колiр, а  еозин  в  роже-

во-червоний.

     Щоб приготувати основний розчин барвника розчиняють  30

г. азуру 2-еозину i 0,8г. азуру 2 в 250 мл. глiцерину,  наг-

рiваючи прицьому 90-120 хв. при 50 С, а потiм додають 250мл.

чистого метилового спирту. Пiсля вiдстоювання  протягом  1-7

днiв при кiмнатнiй температурi фiльтрують.

         ФIКСАЦIЯ КРОВ'ЯНОГО МАЗКА.

     Перед фарбуванням мазок кровi фiльтрують.  Це  робиться

для денатурацii бiлкiв у клiтинах, при збереженнi iхжиттсвоi

структури iж для закрiплення клiтин на предметному склi. Для

фiксацii використовусться абсолютний метиловий алкоголь. Час

фiксацii - 3-5 хв.

     Перед роботою ,пiсля фiксацii, препарат заливають робо-

чим розчином  (розведеним) барвника  Романовського-Гiмза.  I

залишають на 20-40 хв. Потiм його промивають,  сушать,  див-

ляться пiд мiкроскопом.

         ПIДРАХУНОК ДИФЕРЕНЦIЙОВАНОI ФОРМУЛИ.

     Кров'янi клiтини не розподiляються рiвномiрно  повсьому

препратi.На початку i в кiнцi мазка вiдкладасться  бiльшiсть

великих  клiтин  з   малою    питомою    вагою    (моноцити,

гранулоцити), а в серединi - бiльшiсть малих клiтин, з вели-

кою питомою вагою (лiмфоцити). Порiвняно найбiльш  правильне

спiввiдношення складасться на дiлянках показаних на малюнку:

        ┌───────┬─────┬───────────┬─────┬──────┐

        │       │ ┌─┐ │           │ ┌─┐ │      │

        │       │ │ │ │           │ │ │ │      │

        │       └─┘ └─┘           └─┘ └─┘      │

        │                                      │

        │       ┌─┐ ┌─┐           ┌─┐ ┌─┐      │

        │       │ │ │ │           │ │ │ │      │

        │       │ └─┘ │           │ └─┘ │      │

        └───────┴─────┴───────────┴─────┴──────┘

Тому саме на  них  проводиться  диференцiйований  пiдрахунок

кров'яних тiлець. Пiдрахунок робиться  у  виглядi  меандрiв,

щоб уникнути повторення одних i тих же клiтин.

     Пiдраховують не менше 25 клiтин (краще по  100)  в  4-х

дiлянках вказаних на малюнку. РЕзультат виражають в %.

     Замiсть 4-х малих меандрiв, можна без  грубоi  помилки,

описати 2 великих меандри, тобто злити 2 малих поля  вiдцен-

тру з обох сторiн в одне велике, не роблячи розриву в  сере-

динi. В такому разi в кожному з обох великих полiв  пiдрахо-

вують мiнiмально по 50 клiтин (краще по 100) i результат ви-

ражають в %. Для полегшення розрахункiв використовують  еле-

ментарнi механiчнi лiчильнi машини.


2.5    ВИЗНАЧЕННЯ РIВНЯ  CD3+,CD4+,CD5+,CD8+  ЛIМФОЦИТIВ  У

                     ПЕРИФЕРИЧНIЙ КРОВI.

     1.Кров брали стерильно з лiктьовоi вени вранцi, до вжи-

вання iжi. Лiмфоцити видiляли з гепаринiзованоi  кровi  цен-

трифугуванням на градiснтi Фiкол-Вiрографiну (густина  1,077

г/мл).

     2.1-0,1 млн. лiмфоцитiв в об'смi 50 мкл. вносили в цен-

трифужнi пробiрки i до клiтин додавали 5 мкл. моноклонально-

го антитiла CD8 i iнкубували 30-45 хв. при +4 С.

     3.Додавали 150 мкл. розчину Хенкса i  центрифугували  5

хв. при g 200.

     4.Вилучали супернатант. Потiм вносили 50  мкл.  розчину

Хенкса, клiтини суспендували, додавали 150 мкл. розчину Хен-

кса i центрифугували 5 хв. при g 200.

     5.Вилучали супернатант. До осаду вiдмитих клiтин  дода-

вали 50 мкл. F(ab)2-Фрагментiв овечих антитiл  до  Ig  мишi,

помiчених ФIТЦ i розбавлиних 1:100. Для розведення  викорис-

товували фiзрозчин, забуферений фосфатом  (РВS),  що  мiстиь

0,5% желатину i 0,5% азиду натрiю.  Клiтини  суспензували  i

iнкубували 30 хв. при 4 С.

     6.Клiтини 2 рази вiдмивали як указано в п.п.3-4.

     7.Пiсля остаточного видалення супернатанту клiтини  ви-

носили на предметне скельце i помiщали в пари формалiну  для

фiксацii на 10-1 хв. Мiченi клiтини аналiзували з  допомогою

мiкроскопу з люмiнiсцентною  насадкою  ЛН-30МС.  Статистичну

обробку матерiалiв проводили звикористанням методики  Андрю-

щенко.


    2.6          СТАТИСТИЧНА ОБРОБКА ДАНИХ

      Одержанi цифровi  результати  були  обробленi  методом

варiацiйноi статистики по Стьюденту  за  допомогою  програми

складеноi аспiрантом кафедри  алгебри  Андрущенко.  Оскiльки

програма написана на мовi Ассемблер, то датиii ропечатку не-

мас можливостi, а тому нижче  наводиться,  як  приклад,  ре-

зультат обробки даних цiсю програмою.

Розрахунок основних характеристик вибiрки

-----------------------------------------

Показник:  cd

1.    2.00000

2.    3.00000

3.    7.00000

4.    8.00000

Середне арифметичне              -      5.000

Дисперсiя                        -     75.111

Середне квадратичне вiдхилення   -      2.944

Похибка середнього арифметичного -      1.472

Коефiцiент варiацii              -     58.878 %

Коефiцiент асиметрii             -      0.000

Ексцес                           -     -0.417

     Програма оброблялася на ПЕОМ IBM PC/XT 286


_@             3.      СТАН  КЛIТИННОГО IМУНIТЕТУ У

          _@       ПРАКТИЧНО ЗДОРОВИХ СТУДЕНТIВ ЧДУ.

    Нами проведене диференцiальне дослiдження показникiв  клiтин-

ного iмунiтету у студентiв 4 курсу  факультетiв  фiзвиховання  та

природничого факультету.

    Встановлено, що у  практично  здорових  волонтерiв,  що  нав-

чаються на 4-му курсi факультету фiзвиховання та природничому фа-

культетi показники рiвня лейкоцитiв в периферичнiй кровi  статис-

тично достовiрно не вiдрiзняються.(Табл.1).

Табл.N1.  Рiвень лейкоцитiв та лiмфоцитiв у практично здорових во-

          лонтерiв студентiв 4-го курсу  природничого  факультету

          та факультету фiзвиховання ЧДУ

 ┌─────┬──────────────────┬───────────┬───────┬──────┬──────┐

 │N п/п│Групи пiддослiдних│Показники  │Лейко- │Лiмфо-│Лiмфо-│

 │     │                  │статистич- │ти     │цити  │цити  │

 │     │                  │ноi обробки│x 10/л │  %   │ г/л  │

 ├─────┼──────────────────┼───────────┼───────┼──────┼──────┤

 │  1  │Практично здоровi │     M     │ 6,3   │32,5  │1,9   │

 │     │волонтери студенти│     б     │ 1,27  │12,4  │0,2   │

 │     │факультету фiз-   │     m     │ 0,5   │5,3   │0,1   │

 │     │виховання         │     n     │ 6     │6     │6     │

 ├─────┼──────────────────┼───────────┼───────┼──────┼──────┤

 │  2  │Практично здоровi │     M     │ 6,7   │24,5  │1,5   │

 │     │волонтери студенти│     б     │ 1,4   │9,6   │0,7   │

 │     │природничого      │     m     │ 0,6   │3,8   │0.1   │

 │     │факультету        │     n     │ 6     │6     │6     │

 ├─────┴──────────────────┼───────────┼───────┼──────┼──────┤

 │                        │     t     │ 0,63  │0,5   │1,3   │

 │                        │     p     │ >0,05 │>0,05 │>0,05 │

 └────────────────────────┴───────────┴───────┴──────┴──────┘

     Прицьому вiдносна i абсолютна кiлькiсть лiмфоцитiв у пе-

риферичнiй кровi обох груп знаходилась в межах вiковоi норми.

    Ми не спостерiгали статистично достовiрних рiзниць рiвня

вiдносноi iабсолютноi кiлькостi лiмфоцитiв.

    Вiдомо, що лiмфоцити с гетерогенною  популяцiсю.  В  ос-

таннiй час субпопуляцii диференцiюють по експресii поверхне-

вих маркерiв [   ]

    Взасмозв'язок  фенотипiчних  i  функцiональних  варiацiй

Т-клiтин реалiзусться через змiну iх  рецепторного  поля  та

експресii молекул, що приймають участь у виконаннi  ефектор-

ноi функцii клiтин [   ]

    Вiдомо, що для Т-клiтин характерна  експресiя  Т-клiтин-

них рецепторiв. До таких рецепторiв  вiдносяться  поверхневi

маркери CD3 [   ]

    Експресiя поверхневого маркеру СD5 проявлясться на бiльш

раннiх стадiях розвитку Т-клiтин.

    Вiдомо, що навiть претомоцити можуть мати такий фенотип:

 CD7+2+1-38+4-8-3-ТКР-

    Таким чином поява у кровi лiмфоцитiв, що експресують по-

верхневий маркер CD5, але не експресують СD3,  свiдчать  про

появу в периферичнiй кровi менш зрiлих лiмфоцитiв. Про  поя-

ву в кровi менш зрiлоi субпопуляцii Т-клiтин  ми  судили  по

рiзницi мiж кiлькiстюлiмфоцитiв СD3+ та СD5+.

    Нами встановлене статистичнодостовiрне пiдвищення  числа

СD5+ лiмфоцитiв у практично  здорових  волонтерiв,  що  нав-

Страницы: 1, 2, 3, 4, 5, 6


Новости

Быстрый поиск

Группа вКонтакте: новости

Пока нет

Новости в Twitter и Facebook

  скачать рефераты              скачать рефераты

Новости

скачать рефераты

© 2010.