Реферат: Вплив кріодеструкції, екстрактів печінки і селезінки на відновні процеси в печінці при експериментальному цирозі
Примітки: активність АлАТ в нормі ‑ 0,37±0,04 ммоль/мл/год; відмінності статистично вірогідні (р < 0,05) в порівнянні з показниками тварин: 1 ‑ інтактних; 2 ‑ з цирозом печінки; 3 ‑ з цирозом і кріодеструкцією печінки; 4 ‑ з цирозом печінки і введенням ЕПС.
Нормалізація рівня печінкових амінотрансфераз через 14-30 діб у тварин з цирозом, що одержували ЕПС, свідчить про їхній позитивний вплив на внутрішньоклітинні репаративн процеси в гепатоцитах. Застосування екстрактів особливо ефективне в поєднанні з методом кріодеструкції частини печінки.
Загальновизнано, що будь-які деструктивні процеси в організмі супроводжуються розвитком синдрому пероксидації, тобто підвищенням рівня вільно-радикальних процесів у тканинах викидом продуктів ПОЛ у кров.
Представлені в табл. 4 дані показують, що в перші три доби рівень ТБКАП в сироватці крові був стотно підвищений у всіх групах дослідних тварин.
Проте вже на 7-му добу спостереження можна було відзначити, що швидкість зниження інтенсивност ПОЛ, виходячи з рівня ТБКАП в сироватці крові, була різною. У групах тварин з цирозом, який не лікували, і кріодеструкцією циротично зміненої печінки зберігався високий рівень ПОЛ – в 2,4-2,2 рази, в той же час у тварин, що одержували ЕПС, перевищення норми становило 1,9-1,8 рази, причому у тварин 4 групи рівень ТБКАП був вірогідно нижчий за аналогічний показник у тварин з цирозом, який не лікували, (р<0,05). Ще більш виражені відмінності були зафіксовані на 14-ту добу спостереження.
Таблиця 4
Рівень ТБКАП (нмоль/мл, % від норми) у сироватці крові щурів з експериментальним цирозом печінки
| Термін спостереження | Групи тварин | |||
| 1 | 2 | 3 | 4 | |
| 1-а доба |
9,83±1,121 277% |
9,54±0,971 269% |
9,27±1,061 261% |
9,12±0,881 257% |
| 3-я доба |
8,86±1,011 250% |
8,71±0,751 245% |
8,69±1,081 245% |
8,73±0,911 246% |
| 7-а доба |
8,52±0,851 240% |
7,74±0,671 218% |
6,87±0,741 193% |
6,31±0,531,2 177% |
| 14-а доба |
7,75±0,651 218% |
6,18±0,591 174% |
5,34±0,441,2 150% |
3,91±0,322,4 110% |
| 30-а доба |
5,43±0,411 153% |
4,21±0,332 119% |
4,15±0,282 117% |
3,75±0,442 105,6% |
Примітки: рівень ТБКАП у нормі 3,55±0,17 нмоль/мл; відмінності статистично вірогідні (р < 0,05) в порівнянні з показниками тварин: 1 ‑ інтактних; 2 ‑ з цирозом печінки; 3 ‑ з цирозом і кріодеструкцією печінки; 4 ‑ з цирозом печінки і введенням ЕПС.
В той час, як у тварин 1 та 2 груп ще зберігався досить високий рівень продуктів ПОЛ в сироватці (перевищення норми в 2,2 і 1,7 рази відповідно), у тварин 3 групи (введення ЕПС) рівень ТБКАП перевищував норму лише в 1,5 рази, а в 4 груп (кріодеструкція + ЕПС) в цей період зафіксована нормалізація даного показника. На 30-ту добу спостереження підвищений рівень ТБКАП в сироватці крові був тільки у тварин з цирозом печінки.
Загальноприйнятим показником стану екскреторної функції печінки є рівень білірубіну в сироватц крові. Білірубін ‑ основний жовчний пігмент, який утворюється в результат розпаду гемоглобіну та інших хромопротеїдів.
Динаміка загального білірубіну в сироватці крові щурів з експериментальним цирозом печінки наведена в табл. 5.
Таблиця 5
Рівень загального білірубіну (мкмоль/л і % від інтактного контролю) в сироватці крові щурів з експериментальним цирозом печінки
| Термін спостереження | Групи тварин | |||
| 1 | 2 | 3 | 4 | |
| 1-а доба |
16,18±1,121 197% |
15,95±1,031 194% |
16,08±1,151 195% |
16,24±1,081 197% |
| 3-я доба |
16,05±1,351 195% |
15,88±0,771 193% |
15,56±1,031 189% |
15,32±1,331 186% |
| 7-а доба |
15,74±0,781 191% |
13,67±0,651 166% |
12,54±0,871 152% |
11,08±0,661 135% |
| 14-а доба |
13,95±1,11 170% |
11,32±0,711 138% |
10,15±0,762 124% |
8,45±0,722,3 103% |
| 30-а доба |
9,68±0,85 118% |
8,50±0,46 103% |
8,64±0,61 105% |
8,17±0,55 99% |
Примітки: рівень загального білірубіну в нормі 8,21±0,54 мкмоль/л; відмінності статистично вірогідн (р < 0,05) в порівнянні з показниками тварин: 1 ‑ інтактних; 2 ‑ з цирозом печінки; 3 ‑ з цирозом і кріодеструкцією печінки.
Експериментальн результати дослідження свідчать, що найбільш активна стимуляція репаративних процесів в циротично зміненій печінці експериментальних тварин спостерігалася при поєднанні кріодеструкції та введення ЕПС. Це виражалося в тому, що тільки в цій групі протягом місяця відновилися до нормального рівня всі досліджуван функції печінки. Через місяць повністю відновився вміст альбуміну в сироватц крові, ще раніше (через 2 тижні) нормалізувалася активність амінотрансфераз, а також рівень продуктів ПОЛ і білірубіну. Тобто одночасне застосування кріодеструкції та екстрактів кріоконсервованих фрагментів печінки і селезінки при лікуванні експериментального цирозу не тільки сприяло відновленню більшост найважливіших функцій печінки, але й удвічі прискорило їх нормалізацію на відміну від застосування вказаних методів окремо.
Вищевикладене свідчить про те, що поєднане застосування кріодеструкції і екстрактів кріоконсервованих фрагментів паренхіматозних органів забезпечує високу ефективність лікування експериментального цирозу печінки у щурів.
ВИсновки
В роботі подан теоретичне і експериментальне узагальнення, а також нове вирішення науково проблеми стимуляції процесів відновлення в циротично зміненій печінці шляхом поєднаного застосування кріодеструкції частини печінки та екстрактів кріоконсервованих фрагментів печінки і селезінки.
1. Встановлено, що застосування кріогепатодеструкції та екстрактів кріоконсервованих фрагментів печінки і селезінки у щурів з експериментальним цирозом зупиняє процеси склерозування циротично зміненої печінки, нормалізує судинне русло та сприя відновленню гістологічної будови і окремих функцій пошкодженого органа.
2. Показано, що дозована кріогепатодеструкція і введення екстрактів кріоконсервованих фрагментів печінки та селезінки щурам з експериментальним цирозом печінки призводять до нормалізації мікроангіоархітектоніки і фукціонування мікроциркуляторного русла в органі-мішені, що характеризується зникненням звивистості синусоїдів, збільшенням кількості мікросудин, що функціонують, збільшенням площі судин з швидким кровострумом та відсутністю агрегац еритроцитів.
3. Виявлено, що дозована кріогепатодеструкція сприяє відновленню часточкової структури пошкоджено при формуванні експериментального цирозу печінки щурів і забезпечує припинення процесу склерозування та його активний зворотний розвиток, що завершується на 30-ту добу після експериментального впливу.
4. Встановлено, що застосування екстрактів кріоконсервованих фрагментів печінки і селезінки стимулює ангіогенез, відновлення гістологічної будови пошкодженого органа сприяє зменшенню фіброза печінки щурів з експериментальним цирозом.
5. Поєднання кріогепатодеструкції з уведенням екстрактів кріоконсервованих фрагментів печінки і селезінки в лікуванні щурів з експериментальним цирозом печінки призводить до практично повної нормалізації органоспецифічної будови ушкоджено печінки вже через 14 діб після експериментального впливу.
6. Показано, що застосування кріогепатодеструкції та екстрактів кріоконсервованих фрагментів печінки і селезінки у щурів з експериментальним цирозом стимулює відновлення функціональної активності пошкодженої печінки: сприяє підвищенню рівня сироваткового альбуміну, зниженню секреції білірубіну, поступовій нормалізац рівня печінкових амінотрансфераз, зниженню інтенсивності процесів ПОЛ.
7. Поєднане застосування локальної кріогепатодеструкції і екстрактів кріоконсервованих фрагментів печінки і селезінки забезпечує найбільш активну стимуляцію відновних процесів в печінці щурів з експериментальним цирозом , скорочуючи терміни відновлення в 2 рази порівняно з дією цих методів при окремому вікористанні.
Список робіт, опублікованих за темою дисертації
1. Олефиренко А.А., Гойденко Н.И., Слета И.В., Гальченко С.Е., Тыныныка Л.Н., Сандомирский Б.П. Криохирургия цирротически измененной печени крыс на фоне введения ксеноэкстрактов паренхиматозных органов новорожденных поросят. Морфологический аспект // Междунар. науч.-практич. конф. “Новое в практической медицинской криологии“(18 ноября). ‑ Москва, 2004. ‑ С. 61-62.
2. Олефиренко А.А., Тыныныка Л.Н., Слета И.В., Гальченко С.Е., Сандомирский Б.П. Некоторые биохимические показатели при экспериментальном циррозе печени крыс и стимуляции регенерации // Материалы науч.-практич. конф. “Лекарства-человеку” (6 декабря). ‑ Харьков, 2004. ‑ С. 107-108.
3. Олефиренко А.А., Слета И.В., Гальченко С.Е., Сандомирский Б.П. Мікроциркуляція циротично змінено печінки після кріодеструкції на фоні введення ксеноекстрактів // Тези доп. Ювілейного VIII з'їзду ВУЛТ (Всеукраїнського лікарського товариства), присвяченого 15-річчю організації (1990-2005). ‑ Івано-Франківськ, 2005. ‑ С. 264-265.
4.
Олефіренко О.О., Луценко Д.Г., Слета I.В.,
Марченко В.C.
Фрактальна морфометрiя мiкроциркуляторного русла печiнки в нормi та при експериментальних
впливах // Проблемы криобиологии. ‑ 2005. ‑ Т.15, №3. ‑
C. 511-512.
5. Олефиренко А.А. Применение экстрактов паренхиматозных ксеноорганов для стимуляции регенераторных процессов в печени // Тезисы VII Международ. конф. молодых онкологов Современные проблемы экспериментальной и клинической онкологии“. ‑ Киев, 2006. ‑ С.62.
6. Olefirenko A.A., Sleta I.V., Galchenko S.E., Sandomirsky B.P. Cryosurgery and xenoextracts when treating experimental liver cirrhosis: «Cryo-2006». ‑ Hamburg, 2006. ‑ P. 74.
7. Олефіренко О.О., Слета І.В., Гальченко С.Є., Сандомирський Б.П. Кріобіологічні підходи до лікування експериментального цирозу печінки // Тези доповідей XI Конгресу світово федерації українських лікарських товариств. ‑ Полтава, 2006. ‑ С. 510-511.
8. Олефиренко А.А., Луценко Д.Г., Слета И.В. Криохирургия и ксеноэкстракты в лечении экспериментального цирроза печени: Матеріали наук.-практич. конф. “Профілактика, діагностика та лікування – основні складов терапії“, Харків, 2006. ‑ С. 68.
Анотації
Олефіренко О.О. Вплив кріодеструкції, екстрактів печінки і селезінки на відновні процеси в печінці при експериментальному цирозі. – Рукопис.
Дисертація на здобуття наукового ступеня кандидата медичних наук за спеціальністю 14.01.35 – кріомедицина. Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України, Харків, 2008.
В даній роботі було вивчено в порівняльному аспекті вплив на процеси відновлення в циротично зміненій печінці дозованої кріодеструкції, суміші екстрактів печінки селезінки, а також досліджено їх спільну дію.
Встановлено, що поєднане застосування тканинних екстрактів і локальної кріогепатодеструкц найбільш активно стимулює відновлення функціональної активності пошкоджено печінки, скорочуючи терміни її відновлення в 2 рази в порівнянні з використанням цих методів окремо, про що свідчила повна нормалізація всіх досліджуваних гепатозалежних метаболічних маркерів, що вивчалися, в більш ранн терміни (на 14-ту добу).
Ключові слова: цироз печінки, кріодеструкція, екстракти, регенерація.
Олефиренко А.А. Влияние криодеструкции, экстрактов печени и селезенки на восстановительные процессы в печени при экспериментальном циррозе. – Рукопись.
Диссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских наук по специальности 14.01.35 – криомедицина. Институт проблем криобиологии и криомедицины НАН Украины, Харьков, 2008.
Несмотря на многолетний опыт и успехи консервативного и оперативного лечения хронических диффузных заболеваний печени, на сегодняшний день нельзя говорить о наличии эффективных методов терапии этих заболеваний. Одной из причин этого является отсутствие препаратов, достаточно полно стимулирующих регенерацию печени.
Для стимуляции процессов регенерации печени используют различные хирургические методы, в том числе криодеструкцию соответствующей массы органа.
В последние годы для оптимизации процессов регенерации в органах и тканях стали применять регуляторные пептиды. Под оптимизацией в данном случае имеется в виду не только поддержка целостности органа или ткани в нормальных условиях, но и быстрое и эффективное ее восстановление при остром или хроническом воздействии какого-либо повреждающего фактора, существенное снижение темпа (или возможности) развития патологических форм регенерации: разрастание фиброзной ткани, метапластическое перерождение клеток (как в случае цирроза) и др.
В работе использованы методы моделирования цирроза печени, прижизненной контактной микроскопии, биохимические, гистологические, морфометрические методы и методы статистической обработки результатов.
В диссертационной работе проведено сравнительное изучение влияния на процессы восстановления в циротически измененной печени криодеструкции, введения экстрактов печени и селезенки, а также их совместного действия.
Микроциркуляция в печени крыс с экспериментальным циррозом после криогепатодеструкции и последующего введения экстрактов печени и селезенки характеризуется отсутствием извилистости синусоидов, свойственной циррозу, а также увеличением количества функционирующих микрососудов, площадь которых увеличилась на 15%.
Гистологические исследования подтвердили, что введение экстрактов печени и селезенки останавливает процесс склерозирования цирротически измененной печени и стимулирует восстановление архитектоники поврежденного органа. Отношение стромы к паренхиме при введении экстрактов печени и селезенки на 14-е сутки составляет 3,16±0,67, тогда как при циррозе печени в этот же срок оно составляет 7,09±1,09.
Сочетание криогепатодеструкции и применение экстрактов приводит к нормализации сосудистого русла и восстановлению гистологической структуры цирротически измененной печени с последующим восстановлением ее функций, что способствует более быстрой нормализации соотношения площади стромы и паренхимы, приближавшегося на 14-е сутки к нормальным значениям (1,79±0,6, р>0,05).
Локальная криодеструкция способствует умеренному восстановлению отдельных функций цирротически измененной печени, что приводит к нормализации уровня печеночных аминотрансфераз, билирубина, активности процессов ПОЛ к 30 суткам наблюдения.
После введения тканевых экстрактов активно восстанавливаются метаболические функции в цирротически изменненной печени, о чем свидетельствуют более ранняя (с 14-х суток) нормализация гепатозависимых ферментов, а также выраженный антиоксидантный эффект.
Таким образом, экспериментальные результаты исследования показали, что наиболее активная стимуляция репаративных процессов в цирротически измененной печени экспериментальных животных установлена при сочетанном использовании криодеструкции и введения экстрактов. Только в этой группе в течение месяца до нормального уровня восстанавливались все исследованные показатели функции печени. Через месяц полностью восстановился уровень альбумина в сыворотке крови, через 2 недели нормализовались активность аминотрансфераз, уровень ПОЛ и билирубина. Одновременное применение криодеструкции и введения экстрактов при лечении экспериментального цирроза не только способствовало восстановлению большинства важнейших функций печени, но и ускорению их нормализации по сравнению с применением указанных методов в отдельности.
Таким образом, результаты сочетанного применения криодеструкции и введения экстрактов печени и селезенки подтвердили высокую лечебную эффективность на модели экспериментального цирроза печени.
Ключевые слова: цирроз печени, криодеструкция, экстракты, регенерация.
Olefirenko O.O. Effect of cryodestruction, liver and spleen extracts on the regenerative processes in the liver during experimental cirrhosis. Manuscript.
Thesis for the candidate of medical science degree in speciality 14.01.35 – Cryomedicine. – Institute for Problems of Cryobiology and Cryomedicine of the National Academy of Sciences of Ukraine, Kharkov - 2008.
The given research deals with a comparative study of the effects of cryodestruction, extracts of spleen and liver and their combined action on the regenerative processes in the cirrotic liver.
Combined application of tissue extracts and local hepatodestruction has been found to exercise the highest regeneration-stimulating effect on the functional activity of the injured liver, while shortening by 2-fold the period, required for its regeneration, as compared with the separate application of the above technique, which is verified by a complete normalization of all the studied hepato-dependent metabolic markers, occurring much earlier (already by the 14th day).
Key words: liver cirrhosis, cryodestruction, extracts, regeneration.
